Pembuatan Kompeten Sel dan Transformasi Metode CaCl2

15/12/09

Kemarin saya dan beberapa kawan satu angkatan menjadi asisten praktikum Bioteknologi. Acaranya adalah pembuatan kompeten sel dan transformasi DNA plasmid. Kegiatan ini dimulai pukul 14.00 dan efektif mulai bekerja sekitar jam 15.00, ternyata total keseluruhan acara praktikum kali ini baru bisa selesai jam 22.45 sangat larut malam untuk mereka yang awalnya memperhitungkan kalo jam 9 malam sudah bisa selesai dan pulang. Saya jadi bertanya-tanya, apa saja yang dilakukan koq waktunya jadi molor begini, mungkin disamping yang melakukan belum berpengalaman (praktikan) jadinya prosedur yang dilakukan harus mereka pelajari dulu teknis pelaksanaannya, belum lagi ditambah terlalu banyak yang bekerja karena mulut dan tangan sama- sama kerja jadilah praktikumnya molor… talk more, do less… hadoh!

Uhm, padahal secara mudah dan singkatnya proses pembuatan kompeten sel bisa saya jelaskan sebagai berikut.

Sebelumnya kita sudah harus menumbuhkan bakteri yang akan digunakan yaitu E. coli strain yang kami gunakan adalah DH 5α, merupakan bakteri coli yang sudah dikondisikan minim plasmid bawaan dari sononya [dari pabriknya gitu] sebanyak satu ose ke dalam 2 ml media LB inkubasi selama 1 malam suhu 37ºC. selanjutnya diambil 1 ml starter tadi diinokulasi ke dalam 50 ml media LB ditumbuhkan pada suhu 37ºC selama 12 jam atau hingga OD600= 0,6 – 0,9.

50 ml suspensi bakteri tadi dimasukkan dalam tabung sentrifus 50 ml. disentrifus pada kecepatan 4000rpm selama 10 menit untuk diambil pelletnya.

bersambung hakaka…. maap belom sempet update

About

ordinary guys, trying to share simples stuff.. visit me at www.priatama.net

Tagged with: , , ,
Posted in Biology, Molecular Biology

Leave a Reply

Fill in your details below or click an icon to log in:

WordPress.com Logo

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Change )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Change )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Change )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Change )

Connecting to %s

%d bloggers like this: